液相色譜儀已經(jīng)遍布各大高校，研究所，醫(yī)院，生化企業(yè)實驗室等等。而市場上的液相色譜儀是五花八門，每個儀器的不同部件的性能又是多鐘多樣，相對于時間緊缺的實驗人員來說，也沒有很多精力去逐個挑選甄別。因此在此對液相色譜儀做個簡單分析。
液相色譜儀由包括輸液系統(tǒng)，進(jìn)樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)，檢測系統(tǒng)，數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，輸助設(shè)備(色譜柱恒溫箱等)幾大部分組成的。但是在機器工作的同時還需要樣本處理設(shè)備的支持。只有各個部分都能協(xié)調(diào)的運作才能發(fā)揮出機器的*的性能。因此我們在選擇儀器的時候需要充分考慮到儀器的方方面面才能拿到自己滿意的機器。
先從液相色譜儀常規(guī)的幾個部件做個簡單的分析。
(一)輸液泵應(yīng)具備如下性能：
?、?RSD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;
?、?流量范圍寬， 0.1～5.0ml/min內(nèi)連續(xù)可調(diào)，有的實驗則需要更大流量;
?、?輸出壓一般應(yīng)能達(dá)到150~400 kg/cm2,流量越大,zui高壓力越低;
?、?液缸容積小,有助于減少流動相死體積，利于清洗。
?、?密封性能好，耐腐蝕。
(二)檢測器
?、僮贤鈾z測器，分為可變單波長檢測器VWD和二極管陣列檢測器DAD，可以檢測有紫外吸收的物質(zhì)
?、跓晒鈾z測器，檢測有熒光的物質(zhì)
?、垡暡钫酃鈾z測器，通用型檢測器，但對環(huán)境要求極為苛刻，而且靈敏度低
?、蹺LSD，蒸發(fā)光散射檢測器
?、軲SD，質(zhì)譜檢測器
常用的是紫外檢測，然后是MSD和ELSD
(三)色譜柱
要求柱效高、選擇性好，分析速度快等。目前市場上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。
一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長基本能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。所以要根據(jù)自己實際情況來選擇合適的柱子。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到*效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
此外，溫度在色譜分析中是個不容忽視的環(huán)境條件，環(huán)境溫度對溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動相的粘度都有影響。而且不同的檢測器對溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對實驗而言是個不容忽視的條件，因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(四)進(jìn)樣器
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，重復(fù)性好，死體積小，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進(jìn)樣方式多種多樣，可分為隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動進(jìn)樣。自動進(jìn)樣器則是市場發(fā)展的趨勢。
(五)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一般專業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)計算處理。進(jìn)口軟件價格比較高，這個自己得根據(jù)資金選擇了。
二元泵和四元泵的區(qū)別二元有兩個泵，泵后混合，氣體的溶解度隨壓力的增大而增大，所以二元高壓混合不會產(chǎn)生氣泡。四元只一個泵(另外一個是輔泵)，是泵前混合，在常壓下進(jìn)行的，兩種液體混合時，會降低氣體在混合溶液中的溶解度，通常會有氣泡產(chǎn)生，所以四元低壓梯度系統(tǒng)一定要配在線真空脫氣機。
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