摘要：研究了紫外分光光度法測(cè)定果糖的方法果糖在鹽酸的作用下生成羥甲基糖醛，其zui大吸收波長(zhǎng)在291nm．果糖濃度在0-30ug/ml范圍內(nèi)服從比爾定律。用
本法測(cè)定了蘋果汁、鴨梨汁和桔子汁中的果糖臺(tái)量
關(guān)鍵詞：分光光度法；果糖；測(cè)定
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1試劑與儀器
1.1.1 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液
稱取0．1000gD一果糖(生化試劑)溶于二次蒸餾水，并定容到1000ml，果糖濃度為0.1000mg／ml；濃鹽酸(分析純)；所有實(shí)驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。
蘋果(產(chǎn)地陜西)，鴨梨(產(chǎn)地河北)，桔子(產(chǎn)地海南)單個(gè)果重約100～200g，均購(gòu)于海南省五指山市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng).
1.1.2儀器：TU-1201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京通用公司)．
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
在具塞比色管中加入適量的0．1000mg/ml的果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入3ml濃鹽酸，用二次水定容到l0ml.在沸水中加熱8min，取出用流水冷卻．用1 cm比色皿，以試劑空白為參比，于波長(zhǎng)291nm處測(cè)定其吸光度A．
將待測(cè)果實(shí)沿臍到葉柄方向縱向切成幾塊，用榨汁器擠出果汁，過(guò)濾，取濾液1ml，定容到1000 ml，制成待測(cè)液．按上述方法測(cè)定待測(cè)液．由待測(cè)溶液的吸光度計(jì)算出果汁的果糖含量。
2 結(jié)果與討論
2.1 吸收曲線
按實(shí)驗(yàn)方法用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行吸收光譜掃描，測(cè)出zui大吸收波長(zhǎng)在291nm(見(jiàn)圖1)．當(dāng)果糖濃度增大時(shí)zui大吸收波長(zhǎng)略有增加，本實(shí)驗(yàn)選定291nm為吸收波長(zhǎng)。
2.2 鹽酸的影響按實(shí)驗(yàn)方法對(duì)不同
體積的濃鹽酸進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，不加濃鹽酸時(shí)，吸光度A=0；當(dāng)鹽酸的加入量達(dá)3～4ml時(shí)，吸光度達(dá)到zui大值；繼續(xù)加入鹽酸，吸光度降低(見(jiàn)圖2)，鹽酸的用量以3ml為宜。
2.3 溫度及加熱時(shí)間的影響
對(duì)不同反應(yīng)溫度進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，在100℃的水浴中加熱6min后，吸光度基本不變(見(jiàn)圖3)為使反應(yīng)充分，實(shí)驗(yàn)選定加熱時(shí)問(wèn)為8min。
2.4 放置時(shí)間對(duì)穩(wěn)定性的影響
用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行60min的時(shí)間掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)吸光度在40min內(nèi)有0.003的波動(dòng)，40～60min內(nèi)吸光度逐漸增加0.004(見(jiàn)圖4)．實(shí)驗(yàn)選在40min內(nèi)完成測(cè)定。
2.5工作曲線的繪制
吸取0.1000mg/ml的果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定吸光度，繪制工作曲線(見(jiàn)圖5)，可知呆糖含量在0.30ug／ml范圍內(nèi)服從比爾定律．其線性方程為：A=0.0306c+0.0151，相關(guān)系數(shù)r2=0.9983．對(duì)20ug／ml果糖進(jìn)行11次測(cè)定，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2 6％．
2.6 干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)
按照復(fù)驗(yàn)方法進(jìn)行了干擾試驗(yàn)，結(jié)果表明：抗壞血酸、可溶淀粉無(wú)干擾．葡萄糖濃度大于果糖濃度的5倍時(shí)，葡萄糖對(duì)果糖產(chǎn)生干擾(以誤差小于5％計(jì))．蔗糖對(duì)本方法有較大干擾由于蔗糖在鹽酸中水解產(chǎn)生果糖和葡萄糖，在測(cè)定實(shí)際
樣品時(shí)，果糖測(cè)定值中含有蔗糖水解產(chǎn)生的果糖的量．
3 樣品分析
在上述實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)蘋果汁、鴨梨汁和桔子汁待測(cè)液中的果糖含量進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，各種果汁中的果糖含量的檢測(cè)結(jié)果列于表1，所測(cè)得的果糖含量為總果糖量(包括蔗糖在鹽酸中水解產(chǎn)生果糖)．從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)該方法具有很好的選擇性和高的靈敏度，適用于組成較復(fù)雜的分析對(duì)象中的果糖含量測(cè)定。
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